Promega●V5071●Trypsin/Lys-C Mix, Mass Spec Grade【选购指南】

🔍【产品基础信息】

- 货号：V5071、V5072、V5073

- 英文名：Trypsin/Lys-C Mix, Mass Spec Grade  

- 中文名：Trypsin/赖氨酰肽链内切酶混合液（质谱级）  

- 品牌：Promega

- 规格：20ug、100ug

- 应用领域：蛋白质组学研究、质谱样品制备、翻译后修饰分析、凝胶内消化等  

📝【详细介绍】  

1. 产品组成与技术原理  

V5071是Promega研发的Trypsin与赖氨酰肽链内切酶（Lys-C）的复合型蛋白酶混合物，专为质谱分析优化设计。  

- Trypsin：特异性切割赖氨酸（K）和Arg（R）羧基端，是蛋白组学常用的酶之一。  

- Lys-C：专一性切割赖氨酸羧基端，与Trypsin互补，减少漏切位点，提升序列覆盖率。  

两者协同作用，可覆盖更广泛的切割位点，尤其适用于复杂蛋白质混合物的消化。  

2. 核心应用场景  

- 质谱样品制备：用于胶内消化（如SDS-PAGE胶）或溶液内消化，显著降低漏切率。  

- 翻译后修饰分析：精准识别磷酸化、糖基化等修饰位点，减少假阳性结果。  

- 低丰度蛋白检测：高酶活性设计适合微量样本（如单细胞裂解液）的蛋白提取与鉴定。  

3. 技术特点  

- 高纯度：采用基因重组技术生产，经HPLC纯化，无动物源性污染。  

- 低自水解活性：通过化学修饰抑制酶自身降解，确保长期稳定性（自水解率<0.1%）。  

- 广泛兼容性：适用于酸性（pH 2-3）至中性（pH 7-8）环境，可搭配ProteaseMAX™表面活性剂提升胶内消化效率。  

🎯【核心优势详解】  

1. 精准切割，提升数据可靠性  

- 双酶协同：Trypsin与Lys-C的切割位点互补，减少因单一酶切割导致的序列覆盖不全问题。例如，在胶原蛋白等富含氨酸/赖氨酸的蛋白中，Lys-C可补充Trypsin的切割盲区。  

- 低背景噪音：经严格质检，非特异性切割活性低于0.05%，确保质谱信号清晰。  

2. 高灵敏度与重复性  

- 低用量高效能：推荐酶:底物比为1:50至1:100，消化时间缩短至2小时内（传统酶需12小时以上）。  

- 批次一致性：每批次通过质谱验证，确保切割模式稳定，实验结果可重复。  

3. 灵活适应复杂样本  

- 胶内消化优化：与Promega ProteaseMAX™联用，可提升胶内蛋白回收率至90%以上。  

- 抗干扰能力强：对SDS、尿素等去垢剂耐受性高，适用于变性条件下的蛋白处理。  

4. 用户友好设计  

- 即用型配方：预混酶液无需配制，直接加入样本即可启动反应。  

- 低温保存稳定：-20℃短期保存（建议分装后-80℃长期存放），避免反复冻融。  

❓【常见问题与解答】

Q1：V5071与普通Trypsin有何区别？  

A：V5071为Trypsin/Lys-C复合酶，切割位点更广，漏切率更低；普通Trypsin仅依赖单一酶切，易遗漏部分修饰位点。  

Q2：能否用于固定化金属亲和层析（IMAC）样本制备？  

A：可以。V5071兼容金属螯合树脂，但需优化消化时间以避免金属离子干扰酶活性。  

Q3：消化后的肽段如何纯化？  

A：推荐使用C18固相萃取柱（如Promega Sep-Pak®）或HPLC纯化，去除酶及盐分。  

Q4：是否支持自动化工作站操作？  

A：是的。V5071已通过主流液体处理系统验证，适用于高通量样本处理。  

Q5：长期保存后酶活性会下降吗？  

A：若按推荐条件（-20℃分装保存）存放，活性可维持12个月以上。建议开封后立即分装冷冻。  

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